Diabetologia：酪氨酸但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来肝细胞自身免疫到显现出来1型号冠心病诊疗病症的成果部将在青少年时期就有很好的描绘出，多个肝细胞自身免疫阴性的青少年之后有70%在血清变换后10年末入院冠心病，而随访15年的青少年这一一般而言提高到84%。比起，占诊疗1型号冠心病一半以上的型号1型号冠心病的得病功能还没有取得前提的研究成果。

越来越多的人开始用到已确定系统来判别1型号冠心病的成果：有机基底在显现出来多种肝细胞自身免疫时转到第1过渡期，显现出来血糖异常时转到第2过渡期，显现出来病症时转到第3过渡期。一些多发肝细胞自身免疫阴性的有机基底，在1期和2期，成果较极快，并发展为得病的1型号冠心病。我们之后描绘出了一第一组在首次探测到多种肝细胞自身免疫样本后多于10年无冠心病的很极快成果者，这第一组病症总数少，但形态非常明确。随后，我们辨认出肝细胞自身抗基底特异性CD8+T细胞会反不宜在成果平稳的病症之后大基底不存在，但在最近得病和一直存在的冠心病病症之后很更易探测到。这可能声称，与成果病症相对来说于，这些病症胃溃疡反不宜的恒定增强。

20世纪研究成果声称，尽管恒定性T细胞会(Treg)数目长时间，但冠心病病症存在一些功能不足之处，其之后仅限于对IL-2的反不宜能力减少。此外，冠心病病症之后的效不宜CD4+T细胞会可能对恒定更具抵抗性，发挥为效不宜T细胞会的选择性消退，自然消除的Treg和胃消除的诱导Treg，以及抗基底经历的CD4+T细胞会之后IL-2反不宜消退。本研究成果的目标是描绘出了CD4+恒定性T细胞会(Treg)在一小群极平稳成果者之后的形态，他们的平均年纪为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以青年人蓝本的纵向研究成果，在21岁一般而言确诊的病症子女之后检查1型号冠心病的致命因素。我们之后描绘出了一直平稳成果者的形态，他们始终保持多重肝细胞自身免疫阴性大约10年，但没有显现出来冠心病的诊疗病症，极快性或非透过性胃溃疡。随后，10名继续始终保持无冠心病并愿意提供大量血液样本的平稳成果者纳入T和B细胞会功能分析。在目前的研究成果之后，8名极快成果者(SP第一组)，之后位年纪43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身免疫阴性。所有的发起者都所处1型号冠心病成果的1期，尽管一些人随后挽回了肝细胞自身免疫对某些抗基底的阴性反不宜，然而，一名病症早已所处2期多于6年，但没有显现出来诊疗病症，一名病症被病因为冠心病，该受试者72岁，在通过通过观察实验者样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之后对该ADP透过了单独指标。分开外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会法术和T细胞会选择性试验指标ADP之后Treg的频带、性状和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、举例来说和回归)透过无监督聚类分析，指标Treg性状。

结果：与健康ADP相对来说于，来自极快成果基底的心灵CD4+T细胞会的监督聚类说明了，触发的心灵CD4+ Treg频带提高，与止痛药诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来提高有关。一名HbA1c升高的病症与成果平稳者和给定的对照第一组相对来说于，Treg谱大同小异。功能得出结论，与健康ADP相对来说于，来自平稳成果基底的Treg介导的CD4+效不宜T细胞会选择性明显受损。发挥为对效不宜CD4+T细胞会CD25和CD134表达出来的选择性提高。

所示1 深入的性状分析说明了，CD4+Treg亚型号在极快成果数据流之后提高。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据上面物表达出来鉴定出10个元簇:心灵T细胞会_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞会;HLA-DR + GITR +心灵T细胞会;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)用到9个不同Treg上面转化成的10个元簇的MST。每个节点代表一个一个大(100个一个大)，极大的元一个大(10个元一个大)在节点第一组周围上色。每个节点之后的糕所示回应单个上面的表达出来级别。(b)每个元聚类的热所示，以说明了整基底上面表达出来。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)转化成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的基岩。(e-l)相对来说核素为每个metacluster箱新线所示(核素> 0.05%)确定为HD和SP第一组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞会(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞会(l)。红色左上角代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用到CITRUS的预测模型号推测，Treg频带的提高是成果平稳的logo。分级奈斯(a - f)和柑桔分析(g-k)比较SP发起者和给定的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)基因型号CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的别具特色所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来透过分开，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)第一组以及ADPSP 606(红色)之后CD25+ cd127的频带综合所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯开集的箱新线所示;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来准确度上色，箭头突出的簇被识别为SP和HD数据流之间的不同。(j)箱新线所示说明了了在SP(虎纹)和HD(灰点)第一组之后，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对来说核素(一般而言)。(k)缩放说明了每个簇的性状(粉红色)和Treg上面相对来说表达出来与氛围表达出来(浅蓝色);上列，文件系统Treg_3;下面一行，文件系统Treg_4。氛围与所有其他簇之后上面的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检验

所示3 与健康献血者相对来说于，成果平稳者心灵treg的GITR提高。每个心灵CD4+T细胞会元簇(心灵T细胞会_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞会;HLA-DR + GITR +心灵T细胞会;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表达出来上面的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的表达出来热所示(sp606不仅限于在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇之后所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR表达出来并联，说明了缩放(c)和综合所示(d)。Wilcoxon一对一符号秩和检验，p< 0.07(红色)所有ADP仅限于，p< 0.05(浅蓝色)ADPSP 606和给定的HD不仅限于在测试之后。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之后GITR表达出来，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(红色)并联，说明了缩放(e)和综合所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩检验

所示4 来自平稳成果的CD4+ treg细胞会压制效不宜CD4+T细胞会的能力减少。SP第一组用浅蓝色的新线和左上角回应，HD第一组用金色的新线和左上角回应，红色的新线/左上角回应ADPsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(不宜答者)被上面为CFSE, Treg按通过观察的一般而言试样。用抗CD3 /28微珠活化细胞会，培训3同一天透过流式细胞会法术探测。(a-d)与CD4+不宜答者相对来说不宜的treg培训(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不宜答者培训。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE选择性一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性一般而言。用到阴性对照(触发的响不宜细胞会不含treg)计算选择性一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 效不宜CD4+T细胞会对平稳成果的T细胞会活化的选择性更脆弱。SP第一组用浅蓝色的新线和左上角回应，HD第一组用金色的新线和左上角回应，红色的新线/左上角回应ADPsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(不宜答者)被cfsel上面，treg按通过观察的一般而言试样。用抗CD3 /28微珠活化细胞会，培训3同一天透过流式细胞会法术(CD25反染)和细胞会因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606不宜答者共同培训。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE选择性次之(b)。(c,d) CD25选择性次之(c)和CD134选择性次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训之后的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自平稳成果子的活化心灵CD4+Treg在GITR表达出来之后取得了拓展和充沛，忽视了进一步研究成果Treg在1型号冠心病风险有机基底之后的值得注意的必要性。

原意中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28