Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的每一次中逐渐扩展

从第一次消失胰脏自身特异性到消失1改进型心血管疾病针灸病征的的转变率在学童后期就有很好的描述，多个胰脏自身特异性乙改进型肝炎的学童中所有70%在血清反转后10年内入院心血管疾病，而随访15年的学童这一百分比减低到84%。比起之下，%针灸1改进型心血管疾病一半以上的改进型1改进型心血管疾病的中风前提还不会获得更好的研究成果。

更加多的人开始其所用于仍须种系统来概念1改进型心血管疾病的的转变：个基底在消失多种胰脏自身特异性时转至第1之前，消失高血压异常时转至第2之前，消失病征时转至第3之前。一些多发胰脏自身特异性乙改进型肝炎的个基底，在1期和2期，的转变很慢，并转变为中风的1改进型心血管疾病。我们之前描述了一分组在首次验证到多种胰脏自身特异性比对后至近乎少10年无心血管疾病的近乎慢的转变者，这分组患儿人数近乎少，但特征非常明确。随后，我们发现胰脏自身肝细胞特异性CD8+T中央线粒基底反其所在的转变很慢的患儿中所基本不发挥作用，但在现之前中风和依然发挥作用的心血管疾病患儿中所很难以验证到。这或许确实，与的转变患儿比起，这些患儿自身免疫反其所的调节增强。

早期研究成果确实，尽管调节性T中央线粒基底(Treg)数量正常，但心血管疾病患儿发挥作用一些功能局限性，其中所包括对IL-2的反其所能力降低。此外，心血管疾病患儿中所的现像CD4+T中央线粒基底或许对调节颇具抵抗性，发挥为现像T中央线粒基底的抑止减弱，其本质转化成的Treg和基底外转化成的诱发Treg，以及肝细胞经历的CD4+T中央线粒基底中所IL-2反其所减弱。本研究成果的用意是描述了CD4+调节性T中央线粒基底(Treg)在一小群近乎很慢的转变者中所的特征，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

原理：BOX研究成果是一项以青年人为基础的垂直研究成果，在21岁所列肺癌的患儿亲属中所安全检查1改进型心血管疾病的凶险因素。我们之前描述了依然很慢的转变者的特征，他们维持多重胰脏自身特异性乙改进型肝炎超过10年，但不会消失心血管疾病的针灸病征，慢性或非同步性功能自身免疫。随后，10名之前维持无心血管疾病并愿意提供大量血液比对的很慢的转变者纳入T和B中央线粒基底功能研究。在以外的研究成果中所，8名慢的转变者(SP分组)，中所位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的胰脏自身特异性乙改进型肝炎。所有的参与者都受制于1改进型心血管疾病的转变的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身特异性对某些肝细胞的乙改进型肝炎反其所，然而，一名患儿仍然受制于2期至近乎少6年，但不会消失针灸病征，一名患儿被诊断为心血管疾病，该病人72岁，在搜集实验比对时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据研究中所对该丝氨酸同步进行了单独风险评估。复合外周血单个核中央线粒基底(PBMCs)，采用多常量流式中央线粒基底心法和T中央线粒基底抑止试验风险评估丝氨酸中所Treg的振幅、表改进型和功能。其所用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、相关联和复出)同步进行无委派聚类研究，风险评估Treg表改进型。

结果：与身心健康丝氨酸比起，来自慢的转变基底的思绪CD4+T中央线粒基底的委派聚类看显现出，抑制的思绪CD4+ Treg振幅减低，与低剂量诱发的TNFR相关蛋白(GITR)暗示减低有关。一名HbA1c下降的患儿与的转变很慢者和匹配的印证分组比起，Treg磬有所各不相同。功能研究确实，与身心健康丝氨酸比起，来自很慢的转变基底的Treg介导的CD4+现像T中央线粒基底抑止比起受损。发挥为对现像CD4+T中央线粒基底CD25和CD134暗示的抑止减低。

三幅1 深入的表改进型研究看显现出，CD4+Treg亚改进型在慢的转变函数调用中所减低。由FlowSOM生成的Treg房，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -中央线粒基底上。根据标识物暗示鉴定显现出10个元簇:思绪T中央线粒基底_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T中央线粒基底;HLA-DR + GITR +思绪T中央线粒基底;中央线程Treg_1;中央线程Treg_2;中央线程Treg_3;和中央线程Treg_4。(a)其所用于9个各不相同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个结点值得一提的是一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在结点分组周围成品。每个结点中所的饼三幅透露单个标识的暗示行政级别。(b)每个元聚类的热三幅，以看显现出整基底标识暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成三幅，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较丰度为每个metacluster木箱中央线三幅(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:中央线程Treg_2 (e),中央线程Treg_3 (f),中央线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T中央线粒基底(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T中央线粒基底(l)。黄色左上角值得一提的是慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推大写字母秩核查。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 其所用于CITRUS的预测模改进型确认，Treg振幅的减低是的转变很慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘研究(g-k)较为SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T中央线粒基底上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l青年人的值得一提的是性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR暗示同步进行复合，模拟FlowSOM青年人。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)分组以及丝氨酸SP 606(黄色)中所CD25+ cd127的振幅核心内容三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的木箱中央线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(中央线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(中央线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(中央线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+中央线程T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示准确度渐变，箭头突显现出的簇被辨识为SP和HD函数调用彼此之间的各不相同。(j)木箱中央线三幅看显现出了在SP(黑斑)和HD(灰点)分组中所，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相较丰度(百分比)。(k)直方三幅看显现出每个簇的表改进型(红色)和Treg标识相较暗示与氛围暗示(黄色);上列，中央线程Treg_3;下面恰巧，中央线程Treg_4。氛围与所有其他簇中所标识的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推大写字母秩核查

三幅3 与身心健康献血者比起，的转变很慢者思绪treg的GITR减低。每个思绪CD4+T中央线粒基底元簇(思绪T中央线粒基底_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T中央线粒基底;HLA-DR + GITR +思绪T中央线粒基底;中央线程Treg_2;中央线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个暗示标识的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的暗示热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR暗示并联，看显现出直方三幅(c)和核心内容三幅(d)。Wilcoxon类推大写字母秩和核查，p< 0.07(黄色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(黄色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR暗示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)并联，看显现出直方三幅(e)和核心内容三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推大写字母秩核查

三幅4 来自很慢的转变的CD4+ treg中央线粒基底控制现像CD4+T中央线粒基底的能力降低。SP分组用黄色的中央线和左上角透露，HD分组用蓝色的中央线和左上角透露，黄色的中央线/左上角透露丝氨酸sp606。其所用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T中央线粒基底同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标识为CFSE, Treg按观察的百分比起始。用抗CD3 /28微珠再生中央线粒基底，养成3紧接著同步进行流式中央线粒基底心法验证。(a-d)与CD4+；也者相较其所的treg养成(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者养成。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。其所用于乙改进型肝炎印证(抑制的响其所中央线粒基底不含treg)计算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

三幅5 现像CD4+T中央线粒基底对很慢的转变的T中央线粒基底再生的抑止更敏感。SP分组用黄色的中央线和左上角透露，HD分组用蓝色的中央线和左上角透露，黄色的中央线/左上角透露丝氨酸sp606。其所用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T中央线粒基底同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标识，treg按观察的百分比起始。用抗CD3 /28微珠再生中央线粒基底，养成3紧接著同步进行流式中央线粒基底心法(CD25反染)和中央线粒基底因子研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者协力养成。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE抑止调升(b)。(c,d) CD25抑止调升(c)和CD134抑止调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中所的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

结论：我们得显现出结论的结论是，来自很慢的转变子的再生思绪CD4+Treg在GITR暗示中所获得了扩展和丰富，重申了进一步研究成果Treg在1改进型心血管疾病风险个基底中所的异质性的必要性。

原文显现出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28